解决方案
Light sheet选择性层面照明显微镜

Lightsheet(光片照明)显微镜使用一片层光束从样品侧面激发荧光样品，通过sCMOS相机来检测成像，而入射照明光路和sCMOS接收荧光光路互相垂直。通过移动光束或样品使入射光面激发不同的平面，且激发光束从左右两个方向入射到样品上，光束的角度可以改变，这样就可以得到整个组织的3D图像，同时保证细胞水平的分辨率。由于样品受激发的平面就是成像平面，所以可以将光漂白和光毒性降低到最低。


什么是Lightsheet Microscope?
和普通的显微镜不同，选择性层面照明显微镜（SPIM）的荧光激发和检测被分成两个独立相互垂直的光路。这意味着，可以只激发需要收集荧光信号的样品平面的一个薄层，样品的其他区域无需受到激发光源照射，从而大大降低了光漂白和光毒性。另外，由于采用CCD成像，成像速度比普通的点扫描共聚焦快，适合应用于长时间观察的活细胞成像和发育生物学的相关研究。是较大的活体样品长时间快速成像的最佳选择。

 

Lightsheet 成像特点：
1.光漂白和光毒性低：选择性层面照明显微镜SPIM的荧光激发和检测被分成两个独立互相垂直的光路，这就意味着，只激发焦平面的荧光信号就可以获得高信噪比的图像。
2.单边系统Z轴分辨率600-800nm，同共聚焦一致；双边对称照明系统Z轴分辨率可达300-400nm，Z轴分辨率及信噪比优于共聚焦（600-800nm）。
3.速度快：由于采用高灵敏、高速度的sCMOS 相机成像，全幅成像最快速度可达100fps。
4.激发波长：405-650nm可见波长。
   

系统实物图
   
 

应用特点：


适用样品：细胞、胚胎、斑马鱼、果蝇幼虫、植物根尖等；
优点：双边光路实时照明，照明均一性好，时间分辨率高1-100fps@2048x2048, 分辨率高，灵敏度高；光路效率高，用2个相机采集信号；系统灵活开放；

 
   
   
   
   

Light Sheet选择层面照明显微镜

光毒性最低！！！光漂白最低！！！

发育生物学

选择性层面照明显微镜对U2OS活细胞中荧光标记蛋白三维成像，绿色荧光标记为微管，红色 荧光标记为细胞核。右图为左图两个切面的截面图 (b)LLC-PK1细胞有丝分裂过程中高尔基体（紫色标记）的演变过程，绿色标记为染色体，上、 下图分别为平行和垂直于有丝分裂平面的视图
Rapid three-dimensional isotropic imaging of livingcells using Bessel beam plane illumination.
T.A Planchonet al, VOL.8 NO.5, MAY 2011Nature methods
 

利用选择性层面照明显微镜追踪绘制斑马鱼胚胎早期发育期间细胞分裂及迁移轨迹。绿色标记为细胞向腹侧迁移，青色标记为细胞向背侧迁移，黄色或红色标记为细胞背向或面向体轴迁移，粉色标记为细胞向卵黄迁移

Reconstruction of Zebrafish EarlyEmbryonic Development by Scanned Light Sheet Microscopy.

Philipp J. Keller et al, VOL 322, 14 NOVEMBER 2008,SCIENCE

其他应用


细胞动力学
胚胎发育过程中的细胞迁移、心脏发育、血流动力学、血管发育、神经发育、钙成像等细胞动力学研究


组织工程学
三维细胞培养、组织培养、器官培养的实时成像


厚样本的荧光成像
厚样本的特征结构成像（小鼠早期胚胎、斑马鱼、青锵鱼）
 
 
 
 
 
 
   

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